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二氮嗪对深低温脑缺血再灌注大鼠脑组织NR1表达的影响
[时间:2008-10-30|作者:佚名|来源:5757.Net]
  1.6 脑组织中NMDAR1的表达情况 

  大鼠脑组织予多聚甲醛灌注、固定,完毕后断头取脑,脑组织采用4%多聚甲醛溶液再固定约24h,常规脱水石蜡包埋切片,厚度4μm,取4张连续切片,操作步骤按SABC试剂盒操作说明进行,阴性对照以PBS代替一抗。步骤如下:切片常规脱蜡,3%H2O2灭活内  源性酶,热修复抗原,5%BSA封闭,加入兔抗大鼠NMDAR1多克隆抗体(1∶100)4℃过夜,再滴加生物素化山羊抗兔IgG室温保存20 min,SABC室温20min,滴加新鲜配置的DAB显色液进行显色,苏木素复染,常规脱水,透明,中性树胶封片后,光镜下观察。应用捷达801分析软件测定阳性细胞的灰度值,每张切片随机选择4个高倍视野(400×)观察并取其平均值,以灰度值来表示NR1的表达水平,灰度值越高,免疫组织化学染色越浅,NR1表达越低。  

  1.7 统计学处理 

  所有实验数据用 x-±s 表示,采用SPSS11.0统计软件进行析因设计资料的方差分析,组间比较采用单因素方差分析,两两组间均数之间比较采用SNK检验,相同时间点两组间比较用 t 检验,P <0.05表示差异具有统计学意义。    

  

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